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ADC熱穩(wěn)定性如何評價?
時間:2022-08-04 16:08 點擊次數(shù):30

差示掃描量熱分析(Differential Scanning Calorimetry,簡稱DSC),是在過程控制溫度下,測量輸入到試樣和參比物的能量差隨溫度或時間變化的一種免標(biāo)記(label-free)技術(shù)。通過這些測量,可以表征蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性以及特異性或非特異性蛋白質(zhì)-配體結(jié)合,并定義了各結(jié)構(gòu)域的穩(wěn)定性及其相互作用。儀器測試原理根據(jù)測量方式的不同,差式掃描熱儀一般可以分為兩種:功率補(bǔ)償型和熱流型,兩者最大的區(qū)別在于結(jié)構(gòu)設(shè)計的原理不同。

功率補(bǔ)償型DSC的原理功率補(bǔ)償型差示掃描量熱法是采用零點平衡原理。該類儀器包括外加熱功率補(bǔ)償差示掃描量熱計和內(nèi)加熱功率補(bǔ)償差示掃描量熱計兩種。外加熱功率補(bǔ)償差示掃描量熱計的主要特點是試樣和參比物仍放在外加熱爐內(nèi)加熱的同時,都附加有具有獨立的小加熱器和傳感器,即在試樣和參比物容器下各裝有一組賽貝克(Seeback)熱電裝置。整個儀器由兩個控制系統(tǒng)進(jìn)行監(jiān)控,其中一個控制溫度,使試樣和參比物在預(yù)定速率下升溫或降溫,另一個控制系統(tǒng)用于補(bǔ)償試樣和參比物之間所產(chǎn)生的溫差,即當(dāng)試樣由于熱反應(yīng)而出現(xiàn)溫差時,通過補(bǔ)償控制系統(tǒng)使流入補(bǔ)償熱電傳感器的電流發(fā)生變化。

例如當(dāng)試樣吸熱時,補(bǔ)償系統(tǒng)流入試樣側(cè)加熱器的電流增大;試樣放熱時,補(bǔ)償系統(tǒng)流入?yún)⒈任飩?cè)加熱絲的電流增大,直至試樣和參比物二者熱量平衡,溫差消失。這就是所謂零點平衡原理。




功率補(bǔ)償型差示掃描量熱法原理S—試樣;R—參比物;1—溫度敏感元件;2—加熱器

熱流型DSC的原理熱流型差示掃描量熱法主要通過測量加熱過程中試樣吸收或放出熱量的流量來達(dá)到DSC分析的目的,有熱反應(yīng)時試樣和參比物仍存在溫度差。該法包括熱流式和熱通量式,兩者都是采用差熱分析的原理來進(jìn)行量熱分析。熱流式差示掃描量熱儀的構(gòu)造與差熱分析儀相近,它利用康銅電熱片作試樣和參比物支架底盤并兼作測溫?zé)犭娕?,該電熱片與試樣和參比物底盤下面的鎳鉻絲和鎳鋁絲組成熱電偶以檢測差示熱流。

當(dāng)加熱器在程序控制單元控制下加熱時,熱量通過加熱塊對試樣和參比物均勻加熱。由于在高溫時試樣和周圍環(huán)境的溫差較大,熱量的損失較大。因此在等速升溫的同時,儀器自動改變差示放大器的放大系數(shù),溫度升高時,放大系數(shù)增大,以補(bǔ)償因溫度變化對試樣熱效應(yīng)測量的影響。

基本應(yīng)用差示掃描量熱儀的基本應(yīng)用包括:材料的熔點測定、熱歷史研究、結(jié)晶度測定、油和蠟的熱分析、固化轉(zhuǎn)變、原材料分析、玻璃化轉(zhuǎn)變溫度的測量、結(jié)晶溫度測量、粘流轉(zhuǎn)變溫度測量、氧化誘導(dǎo)時間測量、比熱測量、等溫結(jié)晶及等溫動力學(xué)研究、純度測量等,廣泛應(yīng)用于材料、生物、食品、醫(yī)藥、臨床、冶金、地質(zhì)、礦產(chǎn)、航空航天、石化、軍事考古等領(lǐng)域。

在生物醫(yī)藥領(lǐng)域,差示掃描量熱技術(shù)(DSC)常用來評價重組蛋白藥物也包含抗體偶連藥物(ADC)。例如在對熱穩(wěn)定性的評估分析手段上,DSC是目前最常用的測量蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性的方法,不僅可以得到變性溫度,還可以得到蛋白質(zhì)變性的焓、熵和自由能等信息。

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